發布時間：2024-01-15 15:02:13
序言：寫作是分享個人見解和探索未知領域的橋梁，我們為您精選了8篇的免疫學分析方法樣本，期待這些樣本能夠為您提供豐富的參考和啟發，請盡情閱讀。
【摘要】目的 評價貝克曼全自動化學發光免疫分析儀檢測甲狀腺激素的效果。方法 測定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,分別計算批內精密度、批間精密度、回收率和線性范圍。結果 T3、T4、FT3、FT4、TSH的批內精密度分別為4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%,批間精密度分別為6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%,回收率分別為96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%,線性范圍分別為0.15～12.3 nmol/L、3.9～387.0 nmol/L、0.3～30.8 pmol/L、1.3～155.0 pmol/L、0.01～150.0 mIU/L。結論 貝克曼全自動化學發光免疫分析系統測定甲狀腺功能具有重復性好、準確度高、可報告范圍寬、測定速度快等優點,適合于臨床應用。
【關鍵詞】化學發光免疫分析法;甲狀腺激素
化學發光免疫分析法是20世紀80年代以來發展起來的一項新的標記免疫技術,在臨床上有廣泛的應用,包括內分泌激素、腫瘤標志物、血藥濃度、傳染病、心血管疾病標志物、貧血及過敏原等,特別是在甲狀腺激素檢測中應用更為廣泛[1]。本文采用貝克曼全自動化學發光免疫分析儀檢測T3、T4、FT3、FT4、TSH,對其方法學進行綜合評價。
1 材料與方法
1.1 儀器貝克曼全自動化學發光免疫分析儀。
1.2 試劑發光試劑、質控品、標準品由貝克曼公司提供。
1.3 血清來源試驗所需血清樣本采自本院門診和住院患者,每例取3ml血,離心3000 r/min,10分鐘,取血清-70℃保存備用。
1.4 檢測方法利用化學發光技術和磁性微粒分離技術相結合的測定方法,其反應原理與放免和酶免中的雙抗夾心法、競爭法相似,嚴格按試劑盒操作說明書操作。
1.5 評價指標
1.5.1 批內精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三種濃度的血清樣本,每種濃度同批平行測定10次,計算平均變異系數(CV)。
1.5.2 批間精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三種濃度的血清樣本各10份,每天各測定1次,共測定10天,計算平均變異系數(CV)。
1.5.3回收率:由貝克曼公司提供原裝3個濃度的標準品,分別測定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,每個濃度平行測定3次,計算平均回收率。
1.5.4 線性范圍收集患者血清標本,取T3、T4、FT3、FT4、TSH濃度高于廠家提供線性范圍上限作為高值濃度水平(H),廠家提供稀釋液作為低值濃度水平(L),用稀釋液稀釋高值濃度血清,形成如下系列濃度檢測標本:1H+0L、4H+1L、3H+2L、2H+2L、2H+3L、1H+4L、0H+1L。用配制成的系列濃度標本平行測定各項指標含量,取平均值作圖,取在坐標紙上呈明顯直線趨勢的各點值進行直線回歸統計,取回歸系數r大于0.9的濃度范圍為可報告的濃度線性范圍。
2 結 果
2.1 批內精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均變異系數分別為4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%。
2.2批間精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均變異系數分別為6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%。
2.3 回收率T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均回收率分別為96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%。
2.4 線性范圍T3所測結果得到回歸方程為y=1.069x-0.2468,r=0.9966,截距經t檢驗,ta=1.36,0.95,截距經t檢驗,ta=0.36,
3 討 論
血清中三碘甲狀原腺氨酸(T3)、四碘甲狀原腺氨酸(T4)、游離三碘甲狀原腺氨酸(FT3)、游離四碘甲狀原腺氨酸(FT4)、促甲狀腺激素(TSH)的測定對甲狀腺疾病的診斷具有重要價值。以往國內實驗室多采用RIA、MIRA檢測血清甲狀腺激素水平,此法雖較準確,儀器與試劑也較為低廉,但對操作人員水平要求較高,對實驗條件及環境有較多要求,且隨著標記抗原的放射性衰減,而使計數不穩定及曲線失真,導致結果偏離,結果重復性差,且可產生放射性污染[2,4]。
近年來發展起來的全自動化學發光免疫分析系統是利用化學發光技術和磁性微粒分離技術相結合的測定方法,其反應原理與放免和酶免中的雙抗體夾心法、競爭法相似。其優點是[3,5]:(1)成熟的單克隆抗體技術或獨特的磁性微粒子技術,保證了反應的高特異性;(2)檢測范圍寬,具有良好的稀釋線性;(3)試劑穩定性好,不需酶促反應,有效期可長達半年;(4)操作簡便,分析過程采用全自動化,減少了人工操作誤差,重復性好;(5)試劑及標本均采用無吸附材料,故相互間的交叉污染率低,干擾因素少;(6)真正的隨機連續檢測,樣本隨到隨測,具有急診優先插入功能。因此全自動化學發光免疫分析系統是目前檢測甲狀腺激素等指標的較好方法。
【參考文獻】
[1] 陶義訓.免疫學和免疫學檢驗[M].第1版.北京:人民衛生出版社,1997:174.
[2] 葉任高,陸再英.內科學[M].第6版.北京:人民衛生出版社,2004:725.
[3] 羅煒,王慧,陳柏銘.化學發光免疫法與放射免疫法測定血清AFP的比較[J].上海醫學檢驗雜志,2000,15(3):149.
【關鍵詞】 臨床免疫學； 免疫檢驗； 實踐； 探索
臨床免疫學是免疫學與臨床醫學的重要連接環節。免疫學檢驗是以免疫學原理為基礎，利用各種具有敏感特性的標記技術，對各種病理和生理的免疫學指標行特異性、超微量地分析，包括細胞的、體液的診治及預后評估[1]。就免疫學檢驗進行準確定位，是臨床醫生依據檢驗結果對疾病進行診治和防控的有效技術手段，具有非常重要的研究價值。本文就臨床免疫學和免疫檢驗的相關實施與探索進行綜述如下。
1 臨床免疫學概念
臨床免疫學屬重要的免疫學分支部分，為免疫學應用到臨床醫學的途徑。免疫學技術的發展和進步與臨床免疫學技術的發展進步有著密切相關性，為臨床及時、科學的應用免疫學新技術，在疾病的治療、監測、確診、預后中均發揮重要的引導及參考作用[2]。隨著醫療科技的不斷進步，臨床上多種免疫學技術已被普遍開展應用，如流式細胞式和免疫細胞檢測及分類技術、血清蛋白電泳技術及各種肽類物質、激素、細胞因子、腫瘤標志的檢測技術等[3]。隨著目前檢驗項目在臨床的不斷增多，臨床醫務人員及患者自身都對臨床檢驗有更高的期待和要求，各種免疫學技術均需緊跟醫療科技發展步伐，更全面、迅速的發展，以盡快的與臨床應用適宜，進而開展臨床免疫學技術的嶄新局面。
2 臨床免疫學促進新技術發展
技術的產生、發展和創新基礎均需有相應的理論，如PCR技術、分子克隆技術等均為遺傳學或分子生物學重要的具有劃時代意義的技術。而這些技巧中，理論基礎為DNA的雙螺旋。同時免疫學的抗體理論與抗原對多種臨床免疫學新技術的產生也起到了推動作用，如標記技術、沉淀、凝集等的發展進展[4]。近年來，受細胞生物學、分子生物學的不斷滲透及免疫學的飛速積習難改展，使免疫學在理論上獲得了較大的突破。
3 臨床免疫學新技術發展特點分析
3.1 多學科交融 臨床免疫學經典技術包括免疫標記技術、溶血技術、中和技術、沉淀技術、凝集技術等。以上技術為臨床免疫學基礎，在臨床免疫學傳統及現代的理論中均占有較重要的地位。以上技術或其基礎上發展創新的技術至今仍在科學研究和臨床檢驗中廣泛應用。但生命科學在不斷發展，不同學科間漸較難明確區分和界定，形成廣泛的滲透和交叉的局面，而遺傳學和分子生物學的適體技術、分子雜交技術、PCR技術、染色質沉淀技術等免疫學新技術，使免疫應用范圍和理論不斷拓展。另外，臨床免疫檢驗中，組織學、細胞學中的顯微鏡技術也為一項重要的技術手段。如由普通顯微鏡與免疫組織化學技術聯合對抗原進行檢測，自身抗體采用熒光顯微鏡與熒光標記技術聯合進行檢測。且電子顯微鏡對細胞間的相互作用和免疫細胞的行為可直接行動態觀察。以上技術的應用，使臨床免疫學技術得到了較大豐富，為發展提供了動力及方向[5]。同時免疫學檢測數據顯著多，用日益復雜，有效分析數據和正確應用結果顯得較為重要故臨床免疫學與生物信息學、醫學統計學等學科的合作與交流也漸趨深入。
3.2 高通量、智能化、自動化的免疫新技術 臨床免疫學檢測具有同步化、智能化、自動化的特點，與傳統手工操作有較大的區別，如微粒子酶免疫技術、電化學發學分析技術等，毛細管電泳技術也在臨床廣泛應用，目的，生物芯片技術使整個檢驗醫學檢測實現了大規模、平行化、高通量的要求。同時，組學技術、后基因技術、酶聯免疫斑點技術的研究也不斷深入，極大的滿足了臨床免疫學需要。
4 免疫學檢驗定義
4.1 臨床免疫學中免疫學檢驗為重要組織部分 以基礎免疫學理論作指導，臨床免疫學對免疫學方法及技術不斷創新，在對疾病研究，特別是自身免疫病、腫瘤、傳染病、血液病、免疫缺陷病、變態反應性疾病的病發機制、診治、預后評估中發揮著重要作用，屬免疫學分支學科，是基礎免疫學內容與臨床免疫學內容的中間環節，為臨床醫師對疾病進行研究的相關技術方法。
4.2 免疫學檢驗的相關定義 依據免疫學原理，特別是抗體與抗原反應原理，對各種敏感標記進行利用，如熒光素、發光物質、放射性同位素等，特異地、超微量的對各種病理和生理免疫學指標進行分析，包括細胞的和體液應用，行疾病診治和評估的一組醫學臨床檢驗項目[6]。其要點為即對抗原抗體反應原理加以利用，又可對免疫學參數的各種內容進行檢測。
5 免疫學檢驗存在的問題
5.1 定位 目前，有一定數量的醫療單位中，尚未設立免疫學檢驗專業，無專業的檢驗設備，無實驗室，無固定的專業的檢驗人員，免疫學檢驗中的一些項目被分散在微生物實驗室和生化實驗室進行檢驗，對專業的發展造成了一定影響。
5.2 質量管理分析 雖免疫學檢驗中大部分項目在各大醫學中已參加了國家衛生部相關室間質量評估活動，但在對室內質量進行控制的環節中，仍較為薄弱。對于大部分免疫學檢驗項目，在質控品和標準品上，國內尚未做到有效統一，雖部分有供應，但項目不全，價格昂貴[7]。故多數試驗室質量控制不達標，導致檢驗質量不穩定。目前，尚普遍存在試劑缺乏統一的現象，檢驗結果中的假陰性、假陽性較難杜絕，為質量管理及標準化檢查帶來了一定難度[8]。同時，專業的免疫學檢驗人員較少，缺乏高素質、高學歷的帶頭人，同時也缺乏嫻熟操作的技術人員[9]。此外，還存在研究內容與臨床缺乏有效結合等，在疾病診治中未發揮有效作用[10]。
6 發展建議
針對免疫檢驗的重要性，醫院領導和檢驗科需重視免疫學檢驗專業的設置，設備引進、項目定位和人員配備，加強培訓，建全室內質量控制[11]，同時成立免疫檢驗學小組，就相關問題進行分析并制定解決方案，各級質量部分需加強參考品、質控品的管理，以提高檢驗效果，使臨床免疫學作用落到實處[12]。
7 小結
綜上，臨床檢驗為臨床免疫學的重要組成部分，各項技術的研發為臨床檢驗學發展提供了機遇，有效縮短了檢測時間，節約了樣本用量，實現了疾病準確、快速、無創的診斷。同時也需正視存在的困難，對復雜的數據行合理和有效的應用，以減輕患者負擔，控制成本。同時加強基礎研究的合作與交流，讓從業者加強各種技術的培養和學習，提高自身綜合素質，以滿足臨床免疫檢驗的要求。
參考文獻
[1] 王松華，羅識奇，周為民，等.28所醫療機構檢驗免疫學部分指標現場檢測調查[J].臨床檢驗雜志，2007，25（2）：154.
[2] Beutler B，Casanova J L.New frontiers in immunology.Workshop on The Road Ahead：Future directions in fundamental and clinical immunology[J].EMBO（European Molecular Biology Organization），2005，6（7）：620-623.
[3] 武建國.老年人抗病毒螺旋抗體測定的假陽性率偏高[J].臨床檢驗雜志，2006，24（4）：241-243.
[4] Hartmann M，Schrenk M，Dottinger A，et al.Expanding assay dynamics：a combined competitive and direct assay system for the quantification of proteins in multiplexed immunoassays[J].Clin Chen，2009，54（1）：956-963.
[5] 周鎮先，吳玉強，黃茂萍，等.國產抗HBs抗體試劑檢測結果的評價[J].臨床檢驗雜志，2007，25（1）：70.
[6] Shoshan S H，Admon A.Novel technologies for cancer biomarker discovery：humoral proteomics[J].Cancer Biomark，2007，3（1）：141-154.
[7] 葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].第3版.南京：東南大學出版社，2006：559-712.
[8] 史俊敏，吳曉勇.臨床檢驗質量管理的重要性[J].檢驗醫學與臨床，2011，12（8）：2377-2378.
[9] 張偉民，宋超.落實質量考核與監督措施，促進獨立實驗室健康發展-對醫學獨立實驗室管理模式的設想與探討[J].浙江檢驗醫學，2009，7（3）：285-287.
[10] 師建國，田玉梅，郭芝芳，等.量子共振檢測在精神分裂癥診斷中的應用（摘要）[C].中國心理衛生協會殘疾人心理衛生分會第八屆學術交流會論文集，2010：288-289.
[11] 袁紅，黃文芳，楊明清，等.對四川省二級及二級以下醫療機構臨床實驗室的檢查及指導效果[J].現代預防醫學，2009，26（18）：126.
[關鍵詞] 原發性骨髓增生異常綜合征；自身免疫異常；臨床特征；生存研究
[中圖分類號] R551.3 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2013）04（a）-0066-03
原發性骨髓增生異常綜合征（myelodysplastic syndromes，MDS）是一組以一系或多系的異常造血或無效造血為臨床特征的克隆性造血干細胞疾病。近年來，MDS與自身免疫性疾病之間的聯系不斷引起學者關注。國外文獻報道[1]，MDS伴發自身免疫性疾病的比率在10%以上，以類風濕性關節炎最為多見，其他包括白塞病、Graves病、克羅恩病等。同時部分患者雖無自身免疫性疾病的臨床表現，但免疫學檢查亦可存在異常。為觀察MDS合并自身免疫異常患者的臨床特征，探討合并自身免疫異常對MDS患者轉歸及生存期的影響，筆者對合并自身免疫性疾病病史或免疫學檢查資料完善的146例MDS患者的臨床資料進行了比較分析，現將研究資料報道如下：
1 資料與方法
1.1 一般資料
收集2009年1月～2012年6月河北省石家望而卻步市趙縣婦幼保健院治療的146例MDS患者的臨床資料。所有患者均經骨髓穿刺涂片、骨髓細胞組織化學染色等檢查確診，免疫學檢查資料完善。根據是否合并自身免疫異常將其分為合并自身免疫異常組和免疫學檢查正常組。自身免疫異常組患者31例，男11例，女20例，年齡31～76歲，中位年齡47歲，其中12例明確患有自身免疫性疾病，9例為現免疫學檢查異常。免疫學檢查正常組115例，其中男75例，女40例，年齡17～82歲，中位年齡51歲。
1.2 研究方法
分析記錄兩組患者一般情況、合并自身免疫性疾病情況、血常規指標、染色體核型分布以及轉白率、中位生存時間等指標。免疫性疾病的實驗室檢查由本院檢驗中心免疫學實驗室完成。隨訪及預后：所有病例隨訪至2012年6月30日，隨訪1～42個月，中位隨訪時間為15個月。
1.3 統計學方法
采用SPSS 17.0軟件對所得數據進行統計學分析，計量資料以中位數表示，采用Wilcoxon秩和檢驗，計數資料構成比組間比較采用χ2檢驗，以P < 0.05為差異具有統計學意義。
3 討論
近年來，自身免疫性疾病對MDS轉歸和預后的影響逐漸引起學者關注。臨床研究發現[2-3]，部分MDS患者合并存在自身免疫性疾病的概率顯著高于后者的自然發病率，另有部分患者雖無自身免疫性疾病的臨床表現，但免疫學檢查亦可存在異常，說明MDS與自身免疫性疾病之間的關系并非偶然。本次研究顯示，146例MDS患者中，15例（33.33%）合并自身免疫性疾病，另有16例（10.96%）患者出現免疫學檢查異常而無臨床癥狀，二者合計占比（21.23%），與文獻報道基本一致[4-5]，為MDS與自身免疫性疾病之間的聯系提供了進一步的佐證。
MDS與自身免疫性疾病合并出現的內在機理尚不明確。部分學者認為[6-7]，MDS和自身免疫性疾病可能源自同一類型免疫異常，如T細胞功能失常，即可在引發造血干細胞破壞（發生MDS）的同時，引起人體其他組織或器官出現自身免疫性疾病。部分MDS患者在給予免疫抑制劑治療后病情可緩解，可為這一說法提供佐證。也有觀點認為[8-9]，MDS本身即可導致一系列自身免疫方面的異常，包括NK細胞減少、B淋巴細胞活化、巨噬細胞受損引發免疫復合物清除受阻等，并進一步出現自身免疫性疾病。由于本次研究未能準確掌握患者MDS與自身免疫異常出現的時間先后，因此尚難對上述假說提供證據。
本次研究顯示MDS患者合并自身免疫異常多見于年齡
此外，自身免疫性疾病對MDS轉歸和預后的影響也不容忽視。對于自身免疫性疾病對MDS患者預后的影響尚無明確結論，有研究認為存在自身免疫異常的MDS患者預后比無免疫異常的MDS患者明顯更差，也有研究顯示兩者間并無統計學差異[11-12]。本次研究顯示，合并自身免疫異常組患者轉白率與免疫學檢查正常組比較雖無統計學差異，但其中位生存期卻明顯縮短。因此筆者傾向認為合并自身免疫異常對MDS的預后尤其是生存期存在不良影響，但此種影響并非因轉化為急性白血病所導致。
總之，自身免疫性疾病與MDS之間的聯系值得臨床工作者進一步研究、總結，以期明確二者間的內在關系、發病機制和治療對策，提高對MDS的治療水平，改善患者預后。
[參考文獻]
[1] Okamoto T，Okada M，Mori A，et al. Correlation between immunological abnormalities and prognosis in mtelodysplastic syndrome pations [J]. Int J Hematol，2009，66（3）：345-351.
[2] 李冰，徐澤鋒，崔蕊，等.合并自身免疫異常的原發性骨髓增生異常綜合征患者臨床特征及生存分析[J].中華血液學雜志，2012，33（7）：527-531.
[3] 鄧飛琦，唐威.骨髓增生異常綜合征與自身免疫性疾病的關聯臨床觀察[J].中華現代內科學雜志，2007，4（6）：504-506.
[4] 秦玲，周莉莉，劉珂，等.骨髓增生異常綜合征異常克隆分布及與外周血細胞變化的關系[J].中國當代醫藥，2012，19（23）：8-9，12.
[5] 李萍，歐陽建，周榮富，等.骨髓增生異常綜合征患者骨髓單個核細胞免疫表型特點及臨床意義[J].臨床血液學雜志，2012，25（4）：434-436.
[6] 付塹.骨髓增生異常綜合征35例臨床療效分析[J].中國醫藥指南，2012，10（16）：106-107.
[7] 易彥，葛圣雷.骨髓增生異常綜合征合并自身免疫病的WPSS分析[J].中國現代醫學雜志，2010，20（13）：2034-2037.
[8] 肖唐杰，陳素娥.骨髓增生異常綜合征40例的臨床分析[J].中國醫藥導報，2012，9（19）：58-59，64.
[9] Hahm C，Mun YC，Seong CM，et al. Single nucleotide polymorphism array-based karyotyping in acute myeloid leukemia or myelodysplastic syndrome with trisomy 8 as the sole chromosomal abnormality [J]. Acta Haematol，2012，129（3）：154-158.
[10] 韓丹，郭靜明.骨髓微環境和骨髓增生異常綜合征的研究進展[J].中國全科醫學，2012，15（21）：2375-2377.
[11] 鄭冬麗.68例骨髓增生異常綜合征臨床診治分析[J].中國醫藥導報，2010，7（25）：157-158.
細胞儀主要由液流系統、光學系統、檢測系統和數據處理系統4個部分組成，有些細胞儀還包括細胞分選系統。當制備成單細胞懸液的待測細胞經特異性熒光染色后放入樣品管中，通過充滿鞘液的細胞流動室，在穩定的壓力下細胞懸液保持在鞘液中心恒速流動，排成單列由噴嘴噴出，形成細胞液柱進入檢測區域，細胞被激光激發后發出散射光與熒光，檢測器根據光的強度將光轉變成與光量成比例的電脈沖，并使電脈沖經過放大處理后，收集結果進行分析、比較和顯示。此外，它還能在檢測時根據液滴偏轉原理進行分選。
2在醫學檢驗中的應用
細胞儀目前在醫院的檢驗科室應用相當廣泛，涉及各個科室的診斷和分析，本文從免疫學、腫瘤學、細胞學以及血液檢查這幾個方面的應用作簡單的介紹。
2．1免疫學方面的應用
目前細胞儀用于免疫學基礎研究和臨床醫學的各個方面。它在臨床醫學中的應用，主要是流式免疫檢測技術。它克服了傳統免疫技術難以準確定量的不足，并且可對單個細胞進行單色或同時多色熒光染色標記。自身免疫疾病、免疫缺陷性疾病、變態反應性疾病、病毒感染、惡性腫瘤等均有淋巴細胞亞群的異常改變。所以檢測外周血T淋巴細胞亞群(CD3、CD4、CD8)及其比值(CD4。。／CD8)是反映機體免疫狀態的重要參數之一。應用不同的CD系列的單克隆抗體，細胞儀能區分出不同的淋巴細胞亞群，并計算出他們的數量及相互間的比例，對控制這些疾病的發生、發展及了解疾病的發病機制、指導臨床治療，都有極其重要的意義I]。細胞儀除了在淋巴細胞亞群分析外，還在細胞特異性標志物的分析中發揮作用。細胞儀能檢測各種免疫細胞的特異性標志物及細胞內的各種細胞因子、表面受體(淋巴因子受體、干擾素受體、白細胞介素受體等)的定量分析，在冠心病、動脈粥樣硬化、惡性腫瘤、自身免疫性疾病的臨床應用相當廣泛。細胞內的受體，如雌激素、糖皮質激素受體的檢測，可指導乳腺癌的性激素治療和糖皮質激素的治療。細胞儀與經典化學同位素標記測定受體法相比，優勢在于它的單細胞測定可在混合細胞中選擇性測定其中一群，可在同一群細胞中觀察每個細胞上受體量的差異，并可將死細胞扣除¨2]。
2．2在腫瘤細胞篩查中的應用
目前，病理學尚不能證實為惡性的交界瘤，經細胞儀檢測出DNA非整倍體細胞時可考慮為惡性腫瘤，而病理學認為兩性的腫瘤經流式細胞儀測出非整倍體則提示有惡性轉變的可能。大量研究表明，癌前病變的癌變率與病變的增生程度一致，而增生程度與DNA含量的異常改變又呈平行關系。細胞儀通過精確定量DNA含量，能對癌前病變的性質和發展趨勢作出判斷，有助于癌前病變的早期判斷。Barrett食管是食管癌的癌前病變之一，Montgomery等用細胞儀技術對58例Barrett食管進行了分析，發現DNA非整倍體中有77為高度不典型增生對于造血系統惡性腫瘤的早期診斷，形態學上一般不具有典型的特征，應用細胞儀的DNA倍體檢測可解決這一問題。國外科學家曾對7例早期T淋巴細胞性淋巴細胞瘤的活體標本進行DNA分析，發現這7例患者的DNA均為非整倍體，而5～12個月后，病理結果才能診斷為淋巴瘤。故認為流式細胞術對淋巴瘤的早期診斷較之形態學方法更為敏感、準確，它可以測得正常細胞與異常細胞間的微小差異，在形態學還不能作出診斷以前就可以提供確切的疾病信息j。
2．3在細胞研究中的應用
細胞儀在細胞學研究中最重要的一環就是研究細胞凋亡的作用。細胞儀檢測凋亡細胞是結合了形態學檢測、生化改變及DNA含量變化、細胞膜磷脂分布的改變及DNA斷裂點標記等幾方面。細胞儀應用于凋亡形態學時，主要是根據細胞凋亡時出現細胞膜皺縮，胞質濃縮，體積減少；因此檢測時前向角散射光(forwardscatter，FSC)下降，而側向角散射光(sidescatter，SS)增加，但這種表現只出現于凋亡最早期，所以，形態學檢測一般用于凋亡期。檢測凋亡較特異的方法可能是對DNA斷裂點進行標記后細胞儀檢測。在細胞凋亡過程中，半胱氨酰基天冬氨酸蛋白酶家族(Caspases)在凋亡早期才能檢測到，在凋亡過程中持續升高，凋亡晚期快速下降，通過細胞儀對Caspases一3的檢測，可動態觀察凋亡的全過程。此外，可利用細胞凋亡時膜內側的膜磷脂酚絲胺酸(Ps)由膜內側翻轉到膜外的特征進行檢測。將熒光標記的親PS的檢測探針Annexin—V與PI聯合標記染色，AV與處于細胞外環境的PS結合。由于早期凋亡細胞膜完整，PI不能通過完整的細胞膜，因此可定量檢測早期凋亡細胞(V—FITC一／PI一群)及壞死細胞(V—FITC／PI一群)_4j。
2．4在血液檢查中的應用細胞儀
【關鍵詞】 免疫學 教學質量
醫學免疫學作為生命科學發展的前沿學科，以其廣度上的多交叉、深度上的多層次、發展上的高速度成為溝通基礎醫學和臨床醫學重要的橋梁學科[1]。當代醫學免疫學的發展日新月異，并和臨床疾病的預防、診斷、治療、發生、發展等諸多環節密切相關，加之免疫學理論內容抽象，名詞概念新穎繁多，內在聯系緊密，使之發展迅速，新理論、新知識不斷涌入。學生初次接觸時，覺得學習較為困難。面對這些特點，如何適應當代醫學免疫學發展的要求，針對免疫學知識體系的特點，有效地提高醫學免疫學教學質量，成為教學的關鍵。筆者從以下幾方面將醫學免疫學教學體會總結如下。
1 培養創新意識、激發學習熱情
高校教育中實施素質教育應以培養學生的創新精神和實踐能力為重點，這就需要我們對傳統的教育模式進行反思，正確處理好傳授知識與激發創新的關系。以傳授知識為主的方法，即以教師講授為中心，實行嚴格的訓練和考試；以激發創新為主的方法，則讓學生感受、理解知識的產生和發展過程，培養學生的科學精神和創新思維習慣，并給以自由發展的機會。前蘇聯、日本等國采用第一種方法，造就了幾百萬工程師；而美國則采用第二種方法，造就了成百的諾貝爾獎獲得者。這兩種教育方法所反映的是繼承與創新的矛盾。我們通過不斷對教學方法進行探討，感到“分層次”教學可獲得較滿意的效果，即對不同層次的學生，在傳授知識與激發創新上有所側重。對于本科生，以傳授知識為主，為授課學生做出簡明扼要的課件，再配以形象生動的圖片或動畫，使學生易于理解和記憶。對于碩士研究生，則著重介紹新進展，如講到超抗原時，就其參與某些病理過程、與自身免疫應答的關系、與免疫抑制的內在聯系并可發揮抗腫瘤效應等方面進行深入的探討，使學生們拓寬視野，培養發散性思維，并能捕捉學科發展的前沿問題。
教師在授課時還可結合授課內容，介紹一些與免疫學有關的諾貝爾獎獲得者的生平事跡，以激發學生的創新欲望和學習熱情。如講解淋巴細胞抗原受體的編碼基因及多樣性時，可簡要介紹因發現免疫球蛋白基因結構而獲得諾貝爾獎的日本學者利根川進(S Tonegawa)；在講解免疫耐受時，可將澳大利亞學者伯內特（FM Bumet）在免疫耐受理論和實驗中所取得的研究成就介紹給學生；在講解單克隆抗體時，可將德國免疫學家克勒（G Kohler）和美國美國生物化學家米爾斯坦（C Milstein）在單克隆抗體的研究和制備中所取得的偉大成就與學生分享[2]，以達到激發學生努力學習，做一名有益于社會的人。
2 靈活多樣的教學方法
根據不同內容、不同授課對象我們分別采用不同的教學方法，如采用導入法、比喻法、比較法、設問法、案例法等多種多樣的教學方法，取得了很好的教學效果。
2.1 導入式教學法 “導入”好比一首樂曲的“引子”，設計巧妙的“導入語”能夠滲透主題，使學生很快進入教學情境，調動學習的積極性。在免疫學的第一章“免疫學概論”教學中采用導入式教學法，設計的“導入語”為：人們常說機體好比國家，而免疫系統好比這個國家的軍隊，那么當外敵入侵時，免疫系統是如何保護機體的呢？由此引出免疫的概念；古代人民認為免疫即免除瘟疫的能力，由此引出抗感染免疫的概念。接下來可提出設問：免疫力僅僅就是抗感染能力嗎?之后又會自然引出現代免疫的新概念。這樣的“開場白”能即刻調動起學習積極性，又可引起學生的濃烈興趣。
2.2 比喻式教學法 應用比喻式教學法，有利于學生對問題的理解。如：講授抗原在免疫應答中的作用時，將抗原比喻為免疫系統的啟動劑，體內一旦有抗原進入即可導致一場戰役，這場戰役稱為免疫應答。為使學生深刻理解抗原抗體的反應具有特異性，將抗原與抗體的結合比喻為鑰匙和鎖的對應關系，一把鑰匙開一把鎖，一種抗原只能與其相應的抗體結合。在講述“補體”激活過程時，將激活過程比喻為“多米諾骨牌”效應，只要推倒第1張，骨牌長龍依次倒下；即只要激活補體C1q成分，其經典途徑的全過程隨后即被活化。在教學中采用貼切、恰當、生動的比喻有時勝過千言萬語，使人豁然開朗，可調動學生的學習興趣，使學生輕松地掌握知識。
2.3 比較式教學法 是通過對知識結構進行對比、歸納，探求其內在本質和規律的一種教學方法。我們在教學中采用比較式教學法施教，對“適應性免疫應答”與“固有性免疫應答”、“補體激活的經典途徑”與“補體激活的旁路途徑”、“外源性抗原處理和提呈”與“內源性抗原處理和提呈”、“T細胞介導的細胞免疫應答”與“B細胞介導的體液免疫應答”、“人工自動免疫”與“人工被動免疫”進行比較，收到了較好的教學效果。
2.4 設問式教學法 教師針對教學內容準確設問，能給學生以懸念，使學生牢固地掌握基礎知識與基本技能。如：在“免疫學診斷及免疫學防治”教學中設置這樣一些問題：為什么可用已知的抗原測定未知的抗體，或可用已知的抗體測定未知的抗原?為什么給機體注入抗原與注入抗體后免疫力維持的時間不同?為什么疫苗一般要注射多次?同學們對提出的問題很感興趣，積極發言回答問題，使學生變被動學習為主動學習[3]。
2.5 案例式教學法 該教學法是在學生掌握了有關基本知識和分析技術的基礎上，在教師的精心策劃和指導下，根據教學目的和教學內容的要求，運用典型案例，將學生帶入特定事件的現場進行案例分析，通過學生的獨立思考或集體協作，進一步提高其識別、分析和解決某一具體問題的能力。如在講授“超敏反應”一章后，我們與學生們共同分析如下案例：一個八歲男孩，最近體重減輕并伴低熱，右側淋巴結腫大。無咳嗽且X線胸部檢查正常。淋巴結檢查肉芽腫性浸潤，但未見抗酸桿菌。現正在等待結核分枝桿菌的微生物學培養結果。結核菌素皮試48小時出現直徑為20mm的腫脹和紅斑。試分析：（1）哪種類型的淋巴細胞與皮膚試驗反應有關？如何診斷？（2）給家庭成員作皮試時，男孩的五歲弟弟也呈陽性反應，但是他很好，胸部X線檢查也正常。他的免疫應答皮試結果說明了什么？有何意義？案例教學中，我們首先有意識地引導學生認真閱讀案例，分析討論，最后，教師對學生的討論情況進行歸納總結。案例式教學法有利于提高學生分析問題、解決問題的能力，以及理論聯系實際的能力。
3 前后聯系、融會貫通
運用前后聯系的方法系統學習，達到對知識的融會貫通。例如講解體液免疫應答時，讓學生先復習一下抗體的基本結構、產生細胞、抗體的生物學功能等，并將學過的抗原提呈過程，T、B細胞的表面標志與后面要講的體液免疫應答過程聯系起來。在教學過程中盡力做到由淺入深，由易到難。由于體液免疫應答過程復雜，涉及到抗原呈遞，TH細胞和B細胞的雙信號活化，漿細胞合成并分泌抗體的過程，每一過程都有許多細胞和細胞因子參與。在講解這一過程時，先在黑板上畫一簡單的反應流程圖，再由淺入深進行講解，逐步將該過程圖添加詳細完整。這一過程的關鍵是TH細胞的活化，其活化的三個階段中雙信號刺激又是關鍵中的關鍵，這一關鍵既是重點，又是難點，按圖講解，層層深入，已達到很好地理解免疫應答這一復雜過程。
4 課尾進行小結、課后及時評估
每次課的內容講授完后，用5～10分鐘將重點、難點再一次復述，或解答學生不太清楚的問題，有益于加深學生對授課內容的系統理解和掌握，對所講授的內容形成一個清晰的脈絡[4]。課后評估就是每次上完課后，自我回顧上課中的教學情況，內容是否講清楚，教法是否得當，時間安排是否合適，與授課計劃有多少出入，學生的反映如何等等。這種回顧，對上好下次課、不斷提升教學水平很有幫助。總之。課堂教學是教師向學生傳授知識的主要方式，也是學生獲取知識的主要途徑。學生獲取和掌握知識的程度，取決于教師的綜合素質和付出程度，為此，督促我們在教學過程中努力發揮教師的主導作用，上好每一堂課。
參考文獻
[1] 湯紅明，趙杰，鄧維秀.“四備一試"在醫學免疫學教學中的運用[J].山西醫科大學學報(基礎醫學教育版)，2004，6(4)：352-353.
[2] 高小明.免疫學教程[M].北京：高等教育出版社，2006:5.
關鍵詞 免疫球蛋白 補體 肝癌
惡性腫瘤患者往往伴有體液免疫功能的異常，為了解肝癌患者體液免疫功能的變化，測定31例肝癌患者血清免疫球蛋白lgG、lgA、lgM及補體C3、C4的水平。旨在探討肝癌患者血清免疫球蛋白以及補體檢測的臨床意義，現將結果報告如下。
資料與方法
2002年1月～2003年8月收治肝癌患者患者31例，作為肝癌組，其中男23例，女8例，年齡36～76歲，平均59.5歲。對照組28例均系來我院體檢無肝病史的健康人群，其中男19例，女9例，年齡33～71歲，平均52.5歲。
測定方法：采用免疫比濁法進行測定，全自動生化分析儀為測定儀器，嚴格按試劑盒說明書操作。
統計學處理：采用兩樣本均值比較的t檢驗進行統計學分析。
結 果
肝癌患者血清中lgG、lgA、水平明顯高于對照組（P
討 論
免疫系統受抗原刺激后，β淋巴細胞轉化為漿細胞，漿細胞分泌免疫球蛋白（lg）并釋放入血液，使機體產生相對的抗原的體液免疫。抗體是指能與相應抗原特異性結合，并有免疫功能的免疫球蛋白[1]。本研究結果表明，肝癌患者血清中的免疫球蛋白lgG、lgA明顯高于對照組（P0.05），說明肝癌患者的體液免疫功能是增強的，主要表現在分泌lgG、lgA增多。腫瘤細胞雖是體內的正常細胞轉變而來，由于發生了深刻的遺傳改變，具有許多不同于正常細胞的生物學特性，其中有些可以被機體的免疫系統識別為“非己”成分并對它產生免疫反應，腫瘤患者的血清中已測出對腫瘤應答的抗體，支持腫瘤患者對腫瘤相關抗原有產生抗體的效應肝癌患者免疫球蛋白lgG、lgA分泌增多的機理還不清楚[2]，是否是針對肝癌的某些腫瘤抗體（特異性或非特異性）而產生的抗體，或者是因為腫瘤細胞產生的抑制因子同樣抑制了TS細胞，使控制β細胞分化的能力減弱，致使β細胞功能亢進，導致lgG升高還有待進一步的研究。
大多人認為肝臟是合成各種補體成分的重要場所。因此肝功能與補體活性關系密切。在一些肝功能下降的疾病，如慢性肝炎、肝硬化患者中，各補體成分可降低[3]。但本研究結果表明，肝癌患者血清中的C3高于對照組（P0.05）。對于肝癌患者補體升高和機制目前尚不明確。但目前主要有以下幾種說法[4]：①肝癌細胞能合成補體。②癌組織的某種刺激作用使補體生產增加。③肝癌患者的補體系統代償增加，以加強機體的體液免疫作用。
綜上所述，本研究表明，肝癌患者的體液免疫功能是增強的。
參考文獻
1 李長英.血清免疫球蛋白測定的臨床意義.工企醫刊，2002，15（1）：92.
2 林長卿，徐長霖，何球藻，主編.醫學基礎免疫學[M[.上海：上海醫科大學出版社，1992：323-335.
化學發光免疫分析包括三大類型: 即標記化學發光物質的化學發光免疫分析、 標記熒光物質的熒光化學發光免疫分析和標記酶的化學發光酶聯免疫分析。化學發光免疫分析技術可測定內分泌激素、 腫瘤標志物、 血藥濃度、 傳染病和心血管疾病標志物、 貧血及過敏原等項目［1］。目前對運動員血清睪酮的檢測， 大多采用放射免疫法， 由于其自動化程度低， 不適用于快速檢測， 又有放射污染。美國Beckman．Coulter公司和法國Pasture研究院合作生產的Access全自動微粒子化學發光免疫分析儀， 其方法學具有高靈敏性、 高精確性、 高穩定性等特點， 無需對樣本進行測前處理， 簡便的自動化操作， 全程僅需15～20 min， 且無放射污染。本室引進Access免疫分析系統對運動員血清T進行定量測定， 現對該方法的臨床應用評價如下。
1 材料和方法
1.1 檢測對象 無錫市體育管理中心運動員122人， 年齡≥15歲， 其中男64人， 女58人。對照組為來我院正常體檢的中學生， 男、 女各30人。采運動員清晨靜脈血2 mL， 分離血清后進行檢測。
1.2 材料 血清睪酮的檢測采用Access磁微粒化學發光免疫分析系統。Access免疫分析系統及配套的T試劑盒， 沖洗緩沖液， 堿性液， 酸性液， 定標液， 基質液(Substrste)， 反應杯(RV管)由BeckmanCoulter公司提供。
1.3 方法
1.3.1 標準曲線 分別取0、 1.7、 5.2、 13.9、 27.8、 55.5 nmol/L T標準液， 在Access免疫分析系統中執行自動定標程序。以2次測定結果的均值， 進行數學邏輯處理， 繪制標準曲線。
1.3.2 統計學分析 兩組間數據采用t檢驗。
2 結果
2.1 精密度測試 取低、 中、 高值的混合血清分別重復測定20次， 計算變異系數CV， 反映批內精密度。每天對不同濃度的質控血清測定1次， 連續20 d， 評價批間精密度。低、 中、 高值批內CV分別為4.1、 2.7、 1.6; 批間CV 分別為4.4、 3.2、 2.6。
2.2 血清睪酮檢測結果及統計分析 運動員血清睪酮檢測結果顯示， 男女運動員與各自相同性別正常人對照組之間無統計學意義（P>0.05）。 表1 運動員血清睪酮檢測
3 討論
Access免疫分析通過在RV管中加入包被單克隆抗體的磁性微粒、 血清樣品、 堿性磷酸酶(ALP)標記的抗原， 經37℃孵育后， 形成競爭法抗原抗體結合成的復合物。再加入底物 AMPDD(一種金剛基二螺［4， 4］二氧乙烷的磷酸脂)發光劑。AMPDD經ALP水解， 生成一種不穩定的陰離子， 該陰離子分解時持續發光， 且與ALP量成正比， 通過測定相對發光單位(relative light unit， RLU)定量檢測血清中物質的濃度［2］。
對運動員血清T檢測結果表明， CV％值較小， 說明儀器重復性較好， 測定結果穩定。 T的測定濃度范圍在0～55.5 nmol/L之間， 能夠滿足運動員正常測試的需要。自動化的Access免疫分析系統， 既具有化學發光檢測的高靈敏度， 又具有免疫分析的高特異性， 準確性、 穩定性， 能夠快速及時的為運動員訓練監控提供可靠的依據。另外， 它是用化學試劑來標記抗原或抗體， 避免了因使用放射性核素而帶來的對人體和環境的危害。
但由于試劑成本的原因， Access免疫分析系統仍未廣泛應用于臨床。隨著臨床需求的進一步擴展， 高靈敏度、 寬線性Access免疫分析系統的將得到廣泛應用。
參考文獻
【關鍵詞】 慢性粒細胞性白血病；分析；核象；染色體；流式細胞儀
慢性粒細胞性白血病是慢性白血病常見類型中的一種，亦是血液系統惡性克隆疾病中較為多見的一種。今年來國內發病有增加趨勢，尤以中老年人居多。若得不到早期診斷和及時的治療，預后不好，影響生活治療甚至危及生命[1]。現如今，對該疾病的診斷新進展有免疫學、遺傳學及分子生物學。不過基礎的還屬核象的實驗室輔檢。依據國際慢粒形態學分期標準，現筆者選本院來診確診為慢性粒細胞性白血病的病人共計30例，對所有病人基本情況、骨髓像情況、染色體以及細胞形態觀察并記錄總結、分析，現將結果報告如下：
1 資料與方法
1.1 一般資料 取2010年3月至2012年8月于本院入院并診斷慢性粒細胞白血病的病人30例，男性為21例，女性為9例，年齡43至79歲，平均（61.4±19.3）歲。慢粒的形態學分期標準依據國際慢粒形態學分期標準。之后對30例病人長期隨訪。
1.2 檢測方法 由本院專科醫師行骨髓活檢，采集新鮮標本，每個標本采取200個細胞。儀器予本院Amnis公司的圖像流式細胞儀ImageStream100，利用流式細胞儀對所有病例進行免疫分型。做NAP細胞化學染色，準備染色體培養。觀察骨髓象及染色體變化。
1.3 判斷標準[2] 慢粒的形態學分期標準依據國際慢粒形態學分期標準。
2 結果
2.1 骨髓象
2.1.1 細胞化學染色 骨髓涂片檢查結果可見細胞形態特征：細胞化學染色可見細胞形態為：中性粒細胞大小各不相同，圓形或核類圓形，能夠見到凹陷、卷曲、染色質粗，部分能夠見到2、3個細胞核，漿液紫色且較多，能夠見到嗜酸粒和嗜堿粒細胞，然而RBC能夠見到核固縮，發現3例戈謝氏細胞。
2.1.2 骨髓增生度、粒紅比和巨核細胞變化 選取的所有慢性粒細胞白血病病人中，骨髓增生度、粒紅比及巨核細胞的變化5-5000多個不等。核象極活躍的病人共有24例、活躍6例。粒細胞與紅細胞比值無特異性病人3例（10%）、比值升高病人21例（70%）。巨核細胞增高18例（60%）、降低9例（30%）。各慢性粒細胞性白血病病人核象增生度、粒細胞紅細胞比值變化與巨核細胞變化結果見表1：
3 討論
現如今，伴隨慢性粒細胞白血病發病率的增加，以及不良的預后對病人的生活產生的影響加重，專科醫生對慢粒的研究更為深入[3]。對該疾病的診斷新進展有免疫學、遺傳學，不過基礎的還屬核象的實驗室輔檢。明確慢性粒細胞白血病的核象的對更為明確的診斷該疾病有重要作用。能夠更熟練的掌握該病的核象特征也為今后的臨床診療工作提供了充分依據。
筆者通過選取本院30例慢性粒細胞白血病的病人并對其核象及染色體進行觀察分析，可以看出：慢粒的骨髓增生明顯，巨核細胞數量有明顯的升高，能夠見到嗜酸粒及嗜堿粒增加。在細胞化學染色可見，該病WBC與健康人的WBC的形態大不相同，有細胞核萎陷、核漿量少等等。觀察染色體可見慢性粒細胞白血病中較多病例Ph+，僅有少數Ph染色體陰性（Ph-）。有核增生極度活躍，以粒系增生為主，造血組織占整個骨髓體積的75%-90%，脂肪含量明顯減少。有研究報道，部分病人可以發生骨髓纖維化。
中性粒細胞堿性磷酸酶的測定，國內報道慢性粒細胞白血病有90%以上有積分的降低或者確實，經治療后白細胞下降可接近正常、炎癥感染時后該酶活性可以升高或者接近正常。其檢測有助于與類白血病反應及其他骨髓增殖性腫瘤相區別，也可以用作為預后的指標。
伴隨我國人口進入老年化階段，老年人相關疾病的不斷增加，加強對慢性粒細胞白血病的分析與討論是行之有效的解決辦法。總而言之，慢性粒細胞白血病病人以核象作為實驗室輔檢能夠作為確診的根據。染色體培養及觀察可以輔助診斷。明確核象的特征可以為臨床上的治療提供可靠的根據。
參考文獻
[1] 羅米，歐陽昭.慢性粒細胞白血病發病機制及治療進展[J].中國現代醫生，2012，50（27）：9-12.
